FluidicLab微流控实验室：制备mRNA-LNP中常见问题处理

一、使用LNP-B0芯片按照Moderna或者Pfizer的公开配方制备mRNA-LNP，DLS测量出现两个峰，一个小于100 nm，另外一个峰大于1000 nm的峰，并且PDI大于0.2以上，应该如何处理？

答：出现这种情况一般有三个原因：

1． 进行DLS测量时测量杯壁上有划痕，对于多次反复重复使用，并反复用吸水纸擦拭的测量杯，该现象更加明显。当激光打在测量杯表面时，测量杯表面会发生激光散射，造成测量有大颗粒的假象。

2． 总流速太快，水和乙醇快速混合时会有气泡产生，测量时溶液中有微气泡残余。

3． 30倍稀释后的LNP粒子浓度太低，背景信号占比比较高，造成PDI过大。

处理方法：

1. 一般不需要做额外处理，只要小于100 nm的峰形正常，经过超滤浓缩后的LNP重新测量，大于1000 nn的峰基本上就会消失，PDI会降低到0.1左右，不会影响后续实验。

2. 如果该情况继续出现的话，降低总流速到3-4 ml/min，观察是否有改善。

二、 制备的LNP粒径和PDI均比较正常，但是转染细胞后效率很差，应该如何处理？

答：一般使用包含GFP mRNA的LNP转染细胞后两天内即可观察到明显的荧光，以96孔板为例，单孔转染对应1 ug mRNA的LNP（*低可降低到0.1 ug）， 转染效率普遍在70%以上，如果没有观察到明显的荧光，建议转染细胞时使用无血清培养基。加入血清会大大降低转染效率。

相关阅读推荐：

实验方案：微流控混合方式制备mRNA脂质纳米颗粒（LNP）