微流控应用：微滴制备仪制备PLGA-HAMA核壳结构微球

本视频为使用FluidicLab微滴/微球制备仪透明质酸(HAMA)微球实验视频教程

所需设备

微滴制备仪(FluidicLab)、双乳化(双包裹)微滴生成芯片、离心机(湘仪)、普通光学显微镜、电脑(win10以上系统）、超声机(语盟，YM-020T)、常规紫外灯(405 nm光源）

所需试剂

微滴生成油(Drop-Surf, FluidicLab)、破乳剂(Drop-Surf, FluidicLab)、PLGA粉末(FluidicLab,50/50,Mw:2 w)、透明质酸(HAMA,FluidicLab）、LAP (Macklin,L862544-1g）

实验步骤参考（以视频字幕为准）

1.试剂配制

(1)内相溶液配制(5%PLGA-二氯甲烷溶液)

称取0.1g PLGA粉末,加入1.9 g(1.43 mL)二氯甲烷,避光超声振荡溶解,并用0.22 um针式过滤器过滤处理。

(2)4%透明质酸溶液配制

称取0.04g透明质酸固体,加入0.96 g超纯水,避光超声振荡溶解。

(3)1%LAP水溶液配制

称取0.050gLAP粉末,加入4.95 g超纯水,避光超声振荡溶解。

(4)中间相溶液配制(2%透明质酸+0.5%LAP)

取500 uL 4% 透明质酸溶液,加入500 uL 1% LAP溶液,避光振荡均匀,并用0.22 um针式过滤器过滤处理。

2.核壳结构微滴制备和固化

连接微滴生成仪管路(详见《微滴制备仪使用手册》);

将装有内相溶液的黑色离心管与通道一连接并与气管连接;

将装有中间相溶液的黑色离心管与通道二连接并与气管连接;

取5 mL微滴生成油,加入通道三储液池并与气管连接;

打开空气压缩机及气源处理开关;

在电脑端设置通道一(内相)、通道二(中间相)和通道三(外相)压力；

排出管路及芯片中的空气;

待空气排出(管路及芯片充满液体)后,分别设定三相压力稳定在一个对应的流速。

透明质酸微滴制备和固化

按《微滴制备仪使用手册》调整流速增加反馈值(Feedback)以快速达到预定设置值；

微液滴稳定生成后,即可开始接收至透明离心管中;

30 min后停止收集,置于405 nm紫外灯下照射5 min固化。

3、核壳结构微球固化后处理

取出离心管底部的微滴生成油;

按V_球 :V=1:2 加入破乳剂,振荡;

1000rpm,30s离心处理并取出下部溶液(后续可重复操作1-2次);

按V_球:V=1:4加入PBS溶液,振荡;

1000rpm,30s离心处理并取出上部溶液(后续可重复操作1-2次);

在显微镜下观察固化后核壳结构微球。