微流控应用：海藻酸钠微球制备-保姆级实验视频教程

实验所需设备及试剂等：

设备：微滴制备仪

试剂：微滴生成油(Drop-Surf，FluidicLab)

破乳剂(Drop-Surf，FluidicLab)

海藻酸钠(FluidicLab)

无水氯化钙(Macklin)

EDTA溶液(0.5 M, pH 7.4,Macklin)

乙二胺-N, N′-二乙酸(EDDA, Macklin)

无水醋酸锌(Macklin)

氢氧化钠(Macklin)

保姆级实验教程操作视频：

操作参考：

1. 试剂配制

1. 2 M CaCl2溶液配制: 称量约2.21 g CaCl2，加入超纯水振荡溶解，*终定容至10 mL备用。
2.  1. 2 %海藻酸钠溶液配制： 称量海藻酸钠粉末约0.12g，加入到9.88 g超纯水中振荡，放置于60 ℃鼓风干燥箱中辅助溶解，*终配制得到质量分数为1.2%的海藻酸钠溶液备用。
3.  2 M NaOH溶液配制： 称量块状NaOH约1.6 g，加入超纯水振荡溶解，*终定容至20 mL备用。
4.  80 mM Ca-EDTA溶液配制(pH=6.7)：取0.4 mL的2 M CaCl2溶液，与1.6 mL 的0.5 M EDTA振荡均匀，加入2 M NaOH 调整pH至6.7左右，*终加入超纯水定容至10 mL。
5.  80 mM Zn-EDDA溶液配制(pH=6.7) 取0.1465 g的无水Zn(CH3CHO2)2与0.1416 g的乙二胺-N, N′-二乙酸(EDDA)，加入5 mL超纯水振荡溶解，随后加入2 M NaOH 调整pH至6.7，*终加入超纯水定容至10 mL。
6.  水相1配制(0.6%海藻酸钠，40 mM Ca-EDTA) 取等体积80 mM Ca-EDTA溶液与1.2%海藻酸钠溶液振荡均匀得到分散相1，用0.22 μm针式过滤器过滤备用
7.  水相2配制(0.6%海藻酸钠，40 mM Zn-EDDA) 取等体积80 mM Zn-EDDA溶液与1.2%海藻酸钠溶液振荡均匀得到分散相2，用0.22 μm针式过滤器过滤备用。

2. 微滴制备仪制备海藻酸钠微滴

• 连接微滴生成仪管路(详见《微滴制备仪使用手册》)
• 在通道一中的储液池中加入约5 mL微滴生成油
• 将水相1(0.6%海藻酸钠，40 mM Ca-EDTA)装入通道二中的储液池中
• 将水相1(0.6%海藻酸钠，40 mM Zn-EDDA)装入通道三中的储液池中
• 打开空气压缩机及气源处理开关
• 在电脑端设置通道一(油相)、通道二(水相1)和通道三(水相2)压力排出管路及芯片中的空气 待空气排出(管路及芯片充满液体)后，设定油相、水相1和水相2流速分别为20、5和5 μL/min 按 《微滴生成仪使用手册》调整流速增加反馈值(Feedback)以快速达到预定设置值 待微液滴生成稳定后，用疏水培养皿接收液滴用并显微镜观察其均匀性 微液滴稳定生成后，即可开始接收至离心管中 10 min后停止收集，开始静置固化。

3. 海藻酸钠微球破乳处理

• 取出底部微滴生成油；
• 按V球：V破=1：2 加入破乳剂，振荡破乳；
• 1000 rpm，30 s离心处理并取出底部破乳剂(后续可重复操作1-2次)；
• *终分散于PBS缓冲液中(可多重复洗几次)；
• 在显微镜下观察固化后海藻酸盐凝胶微球(96.08 μm，2.52%)。